关 鹏，王晨昱，胡 鲜，何流琴，李建中，李铁军

(1.湖南师范大学生命科学学院 动物肠道功能湖南省重点实验室，长沙 410081；2.中国科学院亚热带农业生态研究所 动物营养生理与代谢过程湖南省重点实验室，长沙 410125；3.中国科学院大学，北京 100049)

我国饲用蛋白质资源严重匮乏以及大宗非粮蛋白资源利用率极低，严重制约了我国饲料业和畜牧业的发展。大力开发低蛋白饲粮配制技术是提高蛋白原料利用率，节约饲料资源和降低养殖成本的重要方法。美国nrc(2012)营养需要量标准中仔猪、生长猪以及育肥猪配合饲料粗蛋白(crude protein，cp)需要推荐量分别是20%、18%和16%， 而低蛋白日粮是指在不影响生长性能的前提下按nrc推荐标准降低2～4个百分点的日粮。目前，对低蛋白日粮的研究大多只关注平衡必需氨基酸，却忽略了低蛋白日粮也可能导致非必需氨基酸失衡，从而降低猪生长性能。天冬氨酸(aspartate，asp)又称天门冬氨酸，虽传统营养学中被认为是非必需氨基酸，但其处于糖酵解、嘌呤嘧啶合成等代谢的中间枢纽位置，故在代谢中属于功能性氨基酸。其除了可参与机体蛋白质合成外，在能量代谢、免疫和抗氧化应激等方面都发挥着重要作用。有研究表明，asp能通过改变回肠末端微生物的菌群区系，进而影响猪的脂肪代谢。也有研究发现，日粮添加0.5%或1.0%asp可提高肠道乳糖酶和蔗糖酶活性，改善肠道形态结构，进而反转因脂多糖引起的断奶仔猪生长性能下降。但在实践生产中，本团队前期研究发现，日粮添加1.0%的asp不影响断奶仔猪的生长性能，但低蛋白日粮条件下添加0.5%asp对断奶至育肥阶段猪生长性能、营养物质消化率和肉品质性状影响的研究尚无报道。因此，本研究通过探讨低蛋白日粮添加0.5%asp对其生长性能、血液生理生化指标、营养物质表观消化率和肉品质性状的影响，以期为低蛋白日粮非必需氨基酸的添加水平及饲粮的精准配制提供科学依据。

-天冬氨酸(纯度≥98%)购于张家港市思普生化有限公司。基础日粮购自长沙粒丰饲料科技有限公司，三元杂交(杜洛克×长白×大约克)断奶仔猪购于湖南龙华农牧发展有限公司。

试验选取20头平均体重为(10.93±0.79) kg的健康三元杂交(杜洛克×长白×大约克)断奶仔猪，随机分成两组，每组10个重复，每个重复1头猪，仔猪全部单栏饲养。试验周期共分为3个阶段：断奶阶段、生长阶段、育肥阶段，为期84 d。在断奶、生长、育肥阶段，对照组(con)分别饲喂粗蛋白质含量为17%、15%、13%的玉米-豆粕型基础日粮，试验组(asp)饲喂在基础日粮中添加0.5%天冬氨酸的试验饲粮。天冬氨酸采用取代部分玉米原料的方式添加，非额外添加。基础日粮参照nrc(2012)猪营养需要标准进行配制，基础日粮的组成及营养水平见表1，基础日粮中不添加抗生素和防霉剂。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)table 1 composition and nutrient levels of the basal diet (air dry basis) %

本试验在中国科学院亚热带农业生态研究所动物楼进行，仔猪采用不锈钢单栏饲养。断奶、生长与育肥阶段均自由采食与饮水。每天准确记录每只猪的采食量与健康状况，并按照猪场常规饲养管理程序对仔猪进行其他饲养管理与免疫，定时进行猪舍的消毒与清扫，保持猪舍清洁与通风。

1.4.1 生长性能 准确记录各组试验猪的采食量，计算每头猪的平均日采食量(adfi)，并于试验第1、28、63和84天，以栏为单位空腹称重，计算每头猪的平均日增重(adg), 根据猪的adfi和adg计算料重比(f/g)。

1.4.2 血清生化指标 分别于试验第28、63和84天，各组试验猪空腹12 h后，进行前腔静脉采血。并在4 ℃、3 000 r·min条件下离心15 min制备血清。于-20 ℃冰箱中冻存。用于血清生化指标和血清游离氨基酸含量检测。

血清中的总蛋白(total protein, tp)、白蛋白(serum albumin, alb)、谷丙转氨酶(alanine amino transferase, alt)、谷草转氨酶(serum aspartate aminotransferase, ast)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, alp)、尿素氮(serum urea nitrogen, bun)、葡萄糖(glucose, glu)、血氨(serum ammonia)含量采用cx4型全自动生化分析仪 (美国backman公司)进行检测，试验操作均按相应试剂盒说明进行。

1.4.3 血清游离氨基酸 吸取约2 ml样品于离心试管中，3 000 r·min离心5 min，准确吸取上清液1 ml于另外的离心试管中，加入8%磺基水杨酸1 ml，混匀，静置15 min，离心过后取下层水相，过0.22 μm滤膜后装入上样瓶存于4 ℃，用氨基酸分析仪(l-8900，日本) 测定游离氨基酸的含量。

1.4.4 营养物质表观消化率 分别于育肥阶段试验结束前3 d，以栏为单位进行粪便收集，固定收粪时间为每天下午3点，连收3 d，采用盐酸不溶灰分(aia)作为内源指示剂测定粗蛋白(cp)、粗脂肪(ee)、粗灰分(ash)、粗纤维(cf)表观消化率。

养分表观消化率(%) =100-(饲粮中aia含量/粪中aia含量)×(粪中养分含量/饲粮中养分含量)×100。

1.4.5 肉品质性状 屠宰后的胴体沿背中线分开，左半部分用于肉品质分析，参照ny/t 821—2004《猪肌肉品质测定技术规范》相关方法测定背最长肌的ph、肉色等胴体品质指标。

1.4.6 实时荧光定量 使用trizol试剂从背肌组织中分离出总rna。分离的rna用nano drop 2000c分光光度计(thermo，美国)测定rna浓度和稳定性。利用逆转录试剂盒(thermo，美国)合成了第一条cdna链。每一个样本用sybr-green实时pcr系统进行3次评估。pcr程序如下：95 ℃ 5 min，在95 ℃下扩增45个循环10 s，60 ℃ 10 s，72 ℃ 15 s，扩增检测慢速氧化型肌纤维(1)、快速氧化型肌纤维(2a)、快速酵解型肌纤维(2b)、中间型肌纤维(2x)和内参(-)的表达。使用2方法计算相对表达。引物如表2所示。

表2 本试验所用引物序列table 2 the sequence of primers used in this study

采用excel 2010进行试验数据整理，并用spss 22.0软件进行独立样本检验。以0.05)。

表4 低蛋白日粮添加asp对猪在断奶、生长、肥育阶段的血液生化的影响table 4 effect of low-protein diet supplemented with asp on blood biochemical indexes of pigs during weaning, growing and fattening stages

由图1可知，断奶阶段，与对照组相比，试验组断奶仔猪血清pro、met、phe和thr含量显著降低(