高雪丽，李蒙蒙，加尔恒·别建汗，齐·阿拉达尔*

(1.新疆农业大学动物科学学院，乌鲁木齐 830052；2.阿勒泰地区布尔津县禾木哈纳斯蒙古民族乡农业(畜牧业)发展服务中心，阿勒泰 836500)

马属动物属草食单胃动物，其胃部虽然不能像反刍动物的瘤胃一样对食物进行发酵，但是其肠道的消化功能十分强大，里面包含了极其丰富和高度复杂的厌氧微生物群体。这些肠道菌群通过影响个体的细胞增殖、神经信号等对机体的新陈代谢、生理、营养和免疫产生影响。因此，肠道菌群的适应性变化是马匹适应生存环境变化和食性组成变化的途径之一。

哈萨克马是新疆数量最多的马品种，大多数分布于阿勒泰地区，这里冬季气温一般为-30 ℃左右。山区牧民饲养的哈萨克马能够很好地适应逐水草而居，自然放牧的生存环境。冬季时期用于骑乘或挤奶时，哈萨克马会被圈养。而那些冬季暂无用途的马匹，则被放于山中，在积雪20～30 cm厚的草场上刨雪觅食，吞雪解渴。

有研究发现，不同饲养模式下蒙古马肠道菌群组成结构存在整体性差异。目前，对于蒙古马肠道菌群已有较为系统的研究。李晓斌等研究了新疆伊犁马马驹及新疆本地自繁的纯血马母马与马驹的肠道菌群特点，发现肠道菌群在生长发育过程中呈现阶段性变化，且断奶前马驹与母马粪便菌群多样性和相似性均有一定差异。de fombelle等研究骟马的前肠道消化率时发现，与增加淀粉类谷物饲料相比，饲喂高纤维饲料能够促进胃肠道蠕动，显著缩短饲料在肠道的停留时间，从而增加肠道消化能力，这与其他研究得出的结果一致。在两种不同饮食下，饲喂高纤维饲料的骟马肠道中纤维素降解菌浓度均高于饲喂高谷物饲料的骟马。马属动物被喂养不同的饲料后，其肠道菌群明显不同，饲喂大麦的马匹与饲喂干草的马匹相比，其盲肠和结肠中的厌氧菌(如乳酸杆菌、链球菌等)显著增加，且肠道内纤维素分解菌的群落结构也不相同。

哈萨克马作为我国重要的种质资源，对于其肠道菌群的研究鲜见报道，对于不同饲养模式对哈萨克马肠道菌群组成产生怎样的影响尚不清楚。因此，本研究选取了圈养和自由放牧的哈萨克马作为研究对象，旨在比较不同饲养模式下哈萨克马肠道菌群组成差异，从而探讨自由放牧和圈养因素对肠道菌群结构的影响，为进一步研究哈萨克马肠道菌群奠定基础，也为后期探究马属动物肠道菌群组成差异及功能方面提供理论依据。

选取圈养和自由放牧条件下成年哈萨克马各5匹为试验材料，编号分别为jy1～jy5和fm1～fm5。圈养组马匹以定时投喂干草和补饲一定精料的半放牧半舍饲方式饲养。自由放牧组马匹主要采食积雪下的干草，不投喂精料。圈养组马匹采食的干草为牧民夏季在山中收割而得，与放牧组采食的干草种类相同。在采集圈养组粪便时，圈养马匹的牧民较少，样本有限，因此圈养组样本有骟马粪便和母马粪便，骟马为牧民骑乘马匹，母马为牧民预备挤奶用马匹。放牧组马匹全为骟马。由于肠道菌群受性别影响非常有限，故在本试验中未将性别作为固定因素。在1月份无菌采集新鲜粪便，放于5 ml无菌无酶冻存管中，并立即投入液氮中低温保存。

提取粪便总dna、使用通用引物(f:actctacggaggcagca；r:ggactachvgggtwtctaat)对16s rrna基因的v3-v4区进行pcr扩增、构建文库后经nanodrop定量和文库检测合格后，使用illumina miseq pe250进行上机测序。以上步骤均由上海派森诺生物科技股份有限公司协助完成。

根据上海派森诺生物科技股份有限公司给出的原始序列、有效序列等信息，使用dada2分析进行序列质控(去引物、质量过滤、去噪、拼接和去嵌合体)。利用派森诺基因云分析平台(https://www.genescloud.cn)进行otu聚类、物种注释、α多样性、β多样性以及各分类水平物种组成分析。使用origin 2021、graphpad prism 8.0软件绘制堆积柱状图、条形图。使用ibm spss statistics 26.0软件做独立样本检验，其中，0.05)。放牧组菌群多样性显著高于圈养组(shannon指数：10.853 48. 10.194 9，