t摘要1目的 观察大鼠脑挫伤后不同时间内hspt0蛋白表达的变化关系，探讨其与脑损伤时间的关系。方法 应用免
疫组织化学染色观察自由落体撞击大鼠脑挫伤后hspt0蛋白在伤后不同时间(0．5 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d、28 d)表达
情况。结果0．5 h伤侧皮质挫伤灶周围hspt0阳性细胞表达开始增强，12 h达高峰，24 h降至较低，3 d又再次升高，以后逐
渐下降．28 d恢复至正常对照组水平。结论hspt0免疫组化染色可以作为法医学推断早期脑损伤时间的敏感性指标之一；
hspt0可作为判断脑损伤是否存在及区分生前和死后脑损伤的重要标志。
【关键词】损伤时间；脑挫伤；热休克蛋白70；法医病理学
【中图分类号】d919．1
【文献标识码】a
【文章编号】1007—9297(2o06)02—0126—04
the relationship between of hsp 70 in experimental brain contusion and post—injury time．jia d0 一meil，
zhou yi—wu,he guang-long,et aldepartment offorensic pathology,tonvi medical college，huazhong university ofscience and
technology ,wuhan 430030,china
【abstract】 ive to observe the change of hspt0 at various intervals in experimental traumatic brain injury and investigate
the relationship between the alteration and post-injury interva1． methods 1 e animal model of cerebral contusion was established by
impact to the parietal lobe with a free fall weight．the rats in the treatment group were killed after various survival interval(0．5 h、6 h、
12 h、24 h、3 d、7 d、14 d an d 28 d1．immunohistochemistry sp method was used to evaluate the of hsp70．results expres—
sion of hspt0 positive cells increased at 0．5 h and reached the maximum level 12 h after brain contusion， then the de—
creased gradually to 24 h．the intensity of hspt0 staining increased to a high level at 3 d and decreased to normal at 28 d．
conclusion the changes of hspt0 immunohistochemical staining can be used as a sensitive data for estimating the early post-injury
time in forensic medicine aspect．th e of hspt0 also can be used as an important identification to diagnose brain injury and
to distinguish antemortem and postmortem brain injury．
【key words】injury time，brain contusion，hspt0。forensic pathology
脑损伤后，脑组织的形态结构及功能均会发生显
著变化并可表达多种生物活性物质，利用这些改变可
以用来推断脑损伤时间。[1-5]然而，脑损伤时间的推断
需要多指标综合分析判断，寻找一些与损伤时间具有
良好相关性的指标是法医学研究的重要内容之一 本
实验通过观察自由落体撞击大鼠脑挫伤后hsp 70表
达情况， 旨在揭示其表达与脑损伤时间变化关系，探
讨hsp 70蛋白是否可作为推断脑损伤时间的敏感性
分子标志物，为早期脑损伤时间的法医学鉴定提供依
据。
材料与方法
一
、材料
成年sd雄性大鼠46只(华中科技大学同济医学
院实验动物中心提供)，体重300±50 g。随机分成脑
损伤(伤后o．5 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d、14 d及28 d
共6组，每组5只)、正常对照组(2只)、假性损伤组(2
只)及死后损伤组(2只)。
小鼠抗大鼠hsp70单克隆抗体(武汉博士德生物
工程有限公司；稀释度1：100)、免疫组化s—p即用型
试剂盒和dab显色剂(北京中山生物工程有限公
司)。
二、脑损伤模型制备
参照参考文献[6]自由落体撞击大鼠脑挫伤实验
模型。大鼠经o．4％戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉，头部
【作者简介】贾冬梅(1977一)， 女， 山东寿光人， 硕士研究生， 主要从事法医病理学研究。te1．01397158ch4a．．：e—mail：
wfjdm_7092003c~ahoo．eom．en
【通讯作者】周亦武(1964-)，男，to~ ，教授。研究方向法医颅脑损伤、猝死病理及法医毒理学。te1．+86—27—83657925：e—mail：yi．
wuhedi@hotmail．eom
【基金项目】中国博士后科学基金(20o3034459)，湖北省自然科学基金资助( 2003aba140)
法律与医学杂志2006年第13卷(第2期)
备皮、消毒，于颅顶正中矢状线切开头皮2 em，剥离右
侧颅顶骨膜，用牙科钻在中线旁开一直径约5 mm的
骨窗，暴露硬脑膜并保持其完整，将大鼠平放于撞击
台上，用自由落体装置撞击硬脑膜。即50 g砝码从20
em高处垂直坠落，撞击于硬脑膜正上方的圆柱体，以
圆柱体下降小于2 mm为限。记录打击时间．骨蜡封闭
骨窗，缝合头皮。正常对照组大鼠未做任何处理：假损
伤组仅切开头皮，右顶开骨窗，不致脑损伤。脑损伤组
致伤后，分别于上述时间段取材。
三、组织处理
大鼠经0．4％戊巴比妥钠腹腔麻醉后，经升主动
脉快速灌入100 ml生理盐水，接着滴注400 ml 4 cc4
％多聚甲醛0．1 mol／l磷酸盐缓冲液固定，断头处死取
出整个脑组织，沿挫伤灶中央作冠状切面取材，立即
浸入10％中性福尔马林溶液中固定48 h．取材后常
规脱水，石蜡包埋制成蜡块，连续切片，厚度5 txm。
四、免疫组织化学染色
石蜡切片常规脱蜡至水；3％ h，0，灭活内源性过
氧化物酶；pbs冲洗；抗原修复；pbs冲洗；正常血清封
闭；一抗，4℃过夜；pbs冲洗；二抗，37℃ 30 mi