摘 要：采用柱层析的方法对提取的卵磷脂进行纯化，用消化定磷法测定卵磷脂的含量。结果表明，从蛋黄提取的卵磷脂粗品经柱层析纯化，精制卵磷脂的纯度达99.6%。用消化定磷法可以准确测定卵磷脂的含量，有较高的准确度。

关键词：卵磷脂；纯化；含量；测定

1  引言

   卵磷脂又称为磷脂酰胆碱，是磷脂酸的衍生物，由甘油与脂肪酸和磷酸胆碱结合而成。卵磷脂广泛分布于动物、植物和酵母中。卵磷脂是构成细胞等生物膜、脑组织和神经组织的重要组成成分[1]，对酶的活性也起重要的作用，而且也是乙酰胆碱的重要供给源[2]。卵磷脂因为其乳化特性和安全性，可用于生产人工血浆、脂乳剂。临床上可用于治疗动脉粥样硬化、脂肪肝、神经衰弱、营养不良、胆固醇结石的防治药物及静脉注射脂肪乳的乳化剂。在食品、化妆品和医药领域有着广泛的用途。

   目前，卵磷脂的来源主要是从鸡蛋黄、大豆和猪脑中提取。传统提取卵磷脂的几种方法，如用二甲醚从生蛋黄中提取卵磷脂、用乙醇和酸类从生蛋黄中提取卵磷脂、用丙酮提取卵磷脂和冷冻蛋黄，用乙醇和己烷将卵磷脂与中性脂进行分离，提取卵磷脂等方法，这些方法    提取的卵磷脂达不到食品和医用的高纯度[3]，因此，必须对粗产品或市售的卵磷脂进行纯化。在本工作中，作者采用柱层析的方法对提取的卵磷脂进行纯化，用消化定磷法测定卵磷脂的含量。

2  实验部分

2.1  试剂和仪器

   蛋黄卵磷脂（卵pc）（自提）；中性三氧化二铝（200-300目）；硅胶g；氯仿（ar）；甲醇（ar）；乙醚（ar）；浓硫酸（ar）；钼酸铵（ar）；30%过氧化氢（ar）；磷酸二氢钾（ar）；层析柱（Ф15cm，l 40cm）；紫外检测仪（自制）；台式平衡记录仪（上海大华仪表厂）；分光光度计（日本岛津）；eyela sb-2000旋转蒸发仪（上海eyela有限公司）。

2.2  实验方法和结果

2.2.1  蛋黄卵磷脂的提取

   取12克蛋黄置于150 ml的锥型瓶中，加入35 ml乙醚，搅拌10 min，放置20 min，过滤，于45 oc的条件下，用旋转蒸发仪蒸干乙醚，再放入真空干燥器减压干燥20 min，彻底除尽乙醚，粗提取物离心10 min，取出下层的卵磷脂，约为2克。

2.2.2  蛋黄卵磷脂的精制

   在层析柱中装入25克中性三氧化二铝为固定相，将1克提取的卵磷脂溶于氯仿，以9:1（v/v）的氯仿:甲醇为洗脱液，紫外检测仪接台式平衡记录仪监测收集第二组分[4]，在氮气气氛中旋转蒸干洗脱液得精制的卵磷脂0.6克，充氮气冰箱保存。经过精制的卵磷脂用硅胶g板薄层检验只有一个斑点。

2.2.3  卵磷脂含量的测定

标准曲线的绘制：用消化定磷法测定卵磷脂的含量。按表1中的数据娶浓度为5.718mg/ml的磷酸二氢钾标准溶液于小离心试管中，各加入0.5ml 5mol/l的硫酸，于150-160 oc的烘箱中消化3小时，冷却，加入30%的过氧化氢两滴继续消化1小时，冷至室温，加入4.6 ml0.22%的钼酸铵溶液，再加0.2 mlfsr试剂，于100 oc水浴上加热7min，于室温下于810nm测定吸光度a，结果列入表1。

样