王冠锦,赵 暘

(1. 北京体育大学 研究生院，北京 100084；2. 北京交通大学 体育教学部，北京 100044)

运动锻炼能够降低常见慢性病如各类癌症、心脑血管疾病及2型糖尿病的发病率，对健康的维护及促进具有重要意义。然而，反复的力竭运动可以引起机体发生炎症反应，具体表现为促炎因子及炎性介质表达增加，进而对心脏、肝脏及肾脏等组织造成较大损伤。如何控制力竭运动后的脏器组织损伤及炎症反应一直是人们关注的热点。

黄芪甲苷为羊毛脂醇型四环三萜类皂苷，是黄芪的主要功效成分之一，具有提高免疫能力、抑制病毒增殖、降低氧化应激水平及下调炎症因子表达等多种生物活性。研究发现，黄芪甲苷可以通过抗炎、抑制细胞凋亡、降低细胞毒性、平衡细胞内钙稳态及调节心肌能量代谢等途径发挥保护心脏损伤作用。目前为止，在力竭运动导致的心肌损伤模型中，黄芪甲苷能否同样起到保护作用尚未可知。基于此，本研究拟建立反复力竭运动大鼠模型，灌胃给予黄芪甲苷后，探讨其对心肌损伤是否具有保护作用，并进一步明确该作用与炎症反应及相关信号通路的联系，初步分析保护作用的潜在机制。

黄芪甲苷(含量>98%)购于成都瑞芬思德丹科技公司；h-e染色试剂盒(上海通蔚公司)； inos、no、il-1β、il-6、il-10及tnf-α检测试剂盒(武汉赛培公司)；tlr4、myd88及nf-κbp65及β-actin等一抗(美国abcam公司)；对应二抗，购于北京sino公司。电子天平(ae100型)，瑞士metter公司；动物跑步机(ft-201型)，成都泰盟科技公司；光学显微镜(型号：zx-201hc zx-200hc，深圳众寻仪器公司)；全自动生化分析仪(型号：nvas6801，山东诺安诺泰信息系统公司)；酶标仪(型号：she-3000，北京赛尔福科技公司)；蛋白电泳仪(型号：1703940型，美国伯乐公司)。

成年健康雄性sd大鼠，清洁级，由北京科兴中维公司提供，生产许可证：syxk(京)2020-0054。适应环境后，将40只大鼠分为对照组、运动模型组、运动模型+低剂量黄芪甲苷组(100 mg/kg)及运动模型+高剂量黄芪甲苷组(200 mg/kg)，每组10只。开始运动训练时即给予药物干预，运动训练在每天上午进行，并于训练结束2 h后药物干预；给药剂量参考魏斓等的研究并结合预实验结果，给药方式为灌胃给药，给药频率为1次/d。对照组不给予运动训练，其他操作相同；剩余各组均需给予运动训练，训练方案参照徐祖杰等的研究。大鼠首先用20 m/min的速度在跑步机上(坡度0°)跑步0.5 h，每天运动1次，训练6 d后休息1 d，此过程共训练1周；随后调整坡度为5°，用30 m/min速度跑步，力竭时停止，每天运动1次，训练6 d后休息1 d，此过程连续训练6周。

各组大鼠于6周训练结束并末次灌胃黄芪甲苷后，禁食24 h。用3 ml/kg乌拉坦溶液(20%)麻醉大鼠，腹主动脉取血，离心制备血清，-80 ℃冰箱保存备用。取血后，分离心脏，取相同部位心肌组织，在4%多聚甲醛溶液中保存固定，剩余心肌组织在-80 ℃冰箱中保存备用。

1.4.1 心肌组织病理变化 制作石蜡切片后，常规方法进行h-e染色，封片晾干后，显微镜下检测心肌组织病理变化。

1.4.2 心肌损伤指标 ck、ck-mb、ldh及ast活性等心肌损伤指标检测采用全自动生化分析仪进行。

1.4.3 炎症反应指标 心肌组织加入适量裂解液，电动匀浆机匀浆后，在冰水浴中裂解30 min，离心制备10%心肌组织匀浆液。参照试剂盒说明书指南进行操作，在450 nm波长处测吸光度，根据标准曲线分别计算各组大鼠心肌组织inos活性及no、il-1β、il-6、il-10、tnf-α含量。

1.4.4 心肌组织相关蛋白表达 按照“1.4.3”中的方法，制备10%心肌组织匀浆液，通过western blot法检测心肌组织相关蛋白表达，其中tlr4、myd88、nf-κbp65的稀释比例为1∶1 000，β-actin的稀释比例为1∶2 500，二抗的稀释比例为1∶5 000。抗体结合后滴加ecl试剂显色，用image j1.8.0软件进行灰度值分析。

结果以“平均值±标准差”表示，采用spss20.0软件进行单因素方差分析，