(1内蒙古农业大学 生物工程学院；2内蒙古农业大学 林学院，内蒙古  呼和浩特 010018)
摘 要： 为了寻找褐环粘盖牛肝菌的最佳培养条件，本实验以pach培养基为基础培养基，通过液体培 养，在缓冲体系(磷酸二氢钾——柠檬酸缓冲液,缓冲液按体积占培养基总体积20%)和非缓 冲体系下，比较研究了接种量(分别为1，2，3，4，5块，每块大小为5×5mm2，选生命力 强的菌丝)和ph(分别为2.5，3.5，4.5，5.5，6.5，7.5)对褐环乳牛肝菌(sp9)生长的 影响。结果表明：褐环粘盖牛肝菌生长的最适ph为4.5左右，最佳接种量为4块。添加了缓冲 液的菌丝生长更旺盛。
关键词：褐环乳牛肝菌；ph值；接种量
中图分类号：s718.52  文献标识码：a  文章编号：[ htk]1007—6921(2008)22—0029—03

褐环粘盖牛肝菌 ［suillus luteus (l.:fr) gray］隶属于担子菌纲、伞菌目、牛肝菌科、 粘盖牛肝菌属,是一种能与松属植物共生的菌根真菌，它可以产生多种植物生长激素和生长 调节物质，促进林木发育。对其宿主植物在逆境(干旱，盐碱，病害)中的生长和发育有着积 极作用。将其做成菌根菌剂后将有巨大的市场空间，能取得明显的增产效果和经济效益。该 菌的子实体不但营养丰富，还可以入药，有较高的食用价值和药用价值。但其人工培养生长 缓慢，老化快，使其生产、应用甚至研究都遇到了很大的困难，研究环境条件对其影响是寻 找其快速高效培养的重要手段之一。ph值是影响褐环乳牛肝菌生长的重要因素,因而也受到 了众多研究者的关注，但关于该菌生长的最适ph条件的研究，不同的研究者得出的范围相差 很大。雷增普等在田间试验中发现褐环粘盖牛肝菌具有抗碱(土壤ph8.6)的能力［1］。赵志鹏等室内纯培养结果表明褐环粘盖牛肝菌喜中性生长条件［2］。张茹琴利用 纯培养方法测定了ph值对粘盖牛肝菌、褐环粘盖牛肝菌和褐黄牛肝菌3种外生菌根真菌生长 的影响,以及重金属处理和外生菌根真菌培养前后培养基ph值的变化［3］。结果表明 ,在ph值4.1～7.1的范围内3 种外生菌根真菌均可生长,其中褐环粘盖牛肝菌为5.3～6.7。而陈连庆等人研究表明ph4.5时 褐环粘盖牛肝菌生长最好［4］。刘杨研究发现缓冲浓度在30～40%，接种量为三块时 最佳ph值是4.5［5］。造成这些差异的原因可能很多，如菌株来源不同，研究方法不 同等，但有一点可以肯定，过去的研究中并没有考虑，菌的活动会使其环境ph发生变化，菌 的生命活动引起其环境ph发生改变，使得菌生长在一个ph不断变化的环境中，初始ph并非是 菌丝生命活动所真正经历的ph条件。因而要把握其生长最适的ph必须了解其对环境ph的影响 ，或者尽量控制其生长环境的ph条件，为此本文比较研究了缓冲体系和非缓冲体系中接种量 对环境ph及其生长的影响。
1 实验材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 菌株来源。sp9是褐环乳牛肝菌的一个菌株，是从大青山油松(pinus tabulaeformis )菌根上分离获得的。
1.1.2 基础培养基的组成。本实验以pachlewski(简称pach)培养基为基础培养基，培养基 成分见表1：
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1.2 实验方法
1.2.1 实验处理。
本实验分为有缓冲体系和无缓冲体系两类处理,每个体系下又设6个ph水平，分别为2.5、3.5 、4.5、5.5、6.5及7.5,每个ph水平菌丝接种量分别是1、2、3、4和5块，不设重复。缓冲体 系按照2.1.3中缓冲液的组成配制, 缓冲液按占培养基总体积20%的浓度加入培养基。无缓冲 体系用koh和hcl调节ph值。
1.2.2 培养条件。

本实验所需菌种量大，需先对sp9进行扩大培养，将菌种用接菌刀分割成边长为5mm左右的小 块，接入基础培养基中，每个培养皿接3块。25℃下培养一星期后，选取长势良好的菌种， 在超净工作台中使用双层刀片切取大小相同边长5mm左右的菌块，用接种刀分别接入液体培 养基中，25℃恒温培养箱中静置培养30天。
1.2.3 生物量的测定。

将菌丝从液体液体培养基中取出，蒸馏水冲洗3次后收集菌丝，再于烘箱中60℃烘干，万分 之一天平测量干重。培养后的培养液用phs-3b精密ph计测定ph值，用