【摘要】 目的 为法医学上闭合性颅脑损伤的早期诊断和损伤时间推断提供依据。 方法 建立大鼠脑液压冲
击模型。用免疫组化与图像分析技术分别检测伤后不同时间大鼠脑皮质、海马等部位细胞色素c(cytochrome c，cyt c)
的表达。 结果对照组大鼠脑内cyt c有微量表达，伤后15分钟表达开始增强，伤后3小时达高峰，1天后开始减弱，
7天后基本恢复正常。 结论 cyt c表达的规律性可望为闭合性颅脑损伤的早期诊断及损伤时间推断提供依据。
【关键词】 闭合性颅脑损伤；cyt c；免疫组织化学
【中图分类号】d919．4；r361 ．2
【文献标识码】a
【文章编号】1007—9297(2004)03—0219—03
a study of the of cyt c after fluid percussion brain injury in rats．chen wei—jie，zhang kui—ming，du
xian—gang，xing yu，chen shi—wen，liao zhi—gang．west china school ofbasic medicine and forensic sciences
of sichuan university，chengdu，610041，china；people’sprocuratorateof ningde，fu jian 352100，china
【abstract】 ive to search the ive evidence for the diagnosis on early brain injury and for estimating the time
since brain injury． methods some rats were hurt by fluid percussion，then sacrifice at different time after i~ury．the ex—
pression of cyt c was detected by immunohistochemistry，and the results were asesed by image analysis system ． results
there was a slight of cyt c in control group．in treat—group，he expresion of cyt c increased in 15 minutes after
i~ury，and it reached at peaks in 3 hours after injury，and it began to decrease in 1 day，but remain above control levels t．11 7
days． conclusion the regularity of cyt c might be a useful target for diagnosis of early brain injury，and it also
can be used in estimating the time since brain injury．
【key words】closed brain injury；cyt c；lmmunohistochemistry
颅脑损伤在法医病理学鉴定中十分常见。已有研醉，采用张永亮改进的dixon液压冲击装置[ 制造损伤
究表明，脑损伤后脑血管，特别是脑内小动脉及小静脉模型。分别于伤后15min、lh、3h、6h、12h、ld、4d、7d以
发生痉挛收缩，脑血流量减少，引起脑部缺血缺氧 卫j。4％多聚甲醛溶液进行主动脉灌注固定处死。在脑打击
细胞色素c(cytochrome c，cyt c)是呼吸链中的必要成处尾侧3mm部位作冠状切面，常规石蜡包埋、切片。
分之一，在线粒体复合物Ⅲ 、Ⅳ之间传递电子。近来有 正常对照组大鼠饲养1d后直接处死，手术对照组
研究发现脑缺氧后神经元线粒体功能损伤并释放cyt 大鼠仅行颅骨钻孑l，不做液压冲击，术后2h处死。两组
c是神经元损害的中心环节 ， 。目前关于cyt c在闭 动物取材及组织后处理同实验组。
合性颅脑损伤的诊断与损伤时间推断方面的研究报道 三、主要试剂
较少。本研究对大鼠脑部进行液压冲击造成闭合性颅 兔抗鼠cyt c多克隆抗体(武汉博士德生物工程有
脑损伤，观察伤后大鼠脑内cyt c的表达情况，以期为 限公司)。
闭合性颅脑损伤的早期诊断及损伤时间推断提供依据。 山羊抗兔sp试剂盒、dab显色剂(北京中山生物
材料与方法 技术有限公司)。
一
、实验动物分组 四、染色
健康雄性wistar大鼠50只，体重300～350 g(由四
川大学华西实验动物中心提供)。随机分为10组，分别
对应于正常对照组，手术对照组，损伤后15min、lh、3h、
6h、12h、ld、4d、7d组，每组5只。
二、动物模型的制备
实验动物经10％水合氯醛按0．3g／kg体重腹腔麻
he染色按常规操作进行，免疫组化染色按试剂说
明书进行，以pbs代替一抗作阴性对照。
五、图像分析及统计学处理
在皮质及海马区随机选取5个视野，用biomias图
像分析仪测量cyt c免疫阳性物面积及阳性