【摘要】短串联重复序3~j(short tandem repeats，简称str)由于其本身的优点和检测技术的不断完善，在今后相当长的时间内
仍将是法医应用的重要遗传标记。等位基因分型标准物是str检测试剂盒的组成部分，能够保证各等位基因分型的准确性。本文对
等位基因分型标准物的出现、在法庭科学上的应用以及目前制备方法进行了综述，并对各种制备方法进行比较，以期对各实验室按
照实际需要自行制备相关str的等位基因分型标准物在方法选择上有所帮助，从而更好地进行法医物证鉴定。
【关键词】短串联重复序列；等位基因分型标准物；法医学应用
【中图分类号】q78
【文献标识码】a
【文章编号】1007—9297(2005 j03—0231—04
study on the forensic applications and the construction of allehc ladder．yuan li，lu di．(beijing institute offorensic medicine and
science，beijing]ooo4o,china)
【abstact】 shoa tandem repeats (strs)ale important genetic markers and widely used in forensic community because of theirs
characteristics and advanced examine techniques． allelic ladder is importan t part of str kit and ensure the precise genotype of allelic．
this article states the appearance an d forensic application of allelic ladder， and also study on the methods of construction of allelic ladder
currently、through the comparisons of those construction methods，this issue to be solved the laboratory to select which method to construc—
tion allelic ladder according its needs and condition and to make the most of the forensic judge．
【keywords l short tandem repeats；allelic ladder；forensic application
一
、等位基因分型标准物的出现
pcr—str分型技术具有高效、快速、灵敏等优点，
在个人识别、亲子鉴定、基因绘图上发挥了重要作
用．【l】已经成为法医物证鉴定的主流技术。虽然单核苷
酸多态性(single nucleotide polymorphism，即snp)
被广泛称为第三代dna遗传标记，但由于其成本高，
实际操作困难等．推广使用还需要很长一段时间。目
前和今后相当长的时期内str仍是主要使用的遗传
标记。
当使用以pcr为基础的str多态性的分析技术
时。为了各基因座的等位基因命名，需要一个能比对
的标准物。早先测试str的等位基因命名曾采用片断
长度bp值方法，是与已知分子量标准物同步电泳并
进行比较。这种分子量标准物虽然在本质上也是
dna 但经多次实验发现这种方法存在较严重的缺
陷：相同分子量的dna片段和分子量标准在同一介
质电泳时会出截然不同迁移率的条带。【31 dna在介质
中的电泳迁移率在其他条件相同的情况下不仅与其
分子量有关，还受dna 自身的序列结构影响。序列不
同的dna片断在电泳动力学上存在差异，即使片断
长度相同．它们的电泳迁移率却不一致。这样就不能
准确进行str分型。
最早记载有等位基因分型标准物的是budowle
等[41建立的。他们从100名无关个体中找出d1s80的
16个等位基因．经测序命名后把它们混合作为“lad．
der”．检测未知样品时．只需与该基因座的“ladder”比
较即可得出这个基因座的基因型．当时用的是聚丙烯
酰胺凝胶电泳分离和银染显色。这种检测方法与在此
之前的斑点杂交和southeyn印迹技术来检测限制性
片段长度多态性方法相比有很多优点。在节约时间和
降低错误率上尤为明显。margaret c等在1996年通过
不同分型标准物的比较．进一步证明使用等位基因分
型标准物(allelie ladders)才能对等位基因进行正确分
型，其数据才可以在实验室之间进行交换。圈
二、等位基因分型标准物的概念及法医学
应用
等位基因分型标准物(allelie ladder)是人群中常
见的等位基因混合物，用来与未知样品比对确定基因
【作者简介】袁丽(1971一)，女，硕士研究生，江西九江人，主要从事法医dna检验工作。tel：+86—10-68621174；e—mail：yuanliw—
cy@yahoo．com．cn
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型。同一检材用不同的引物序列进行扩增(不同作者
设计的引物、退火位置不同，可能会出现同一靶座位
上相同等位基因长度不同)或者用不同的探测平台来
分析，那么出现的结果可能不一致。这时我们可以将
该结果与对应的allelic ladder相比较，等位基因峰值
就可以准确地转换成基因分型。而后者是最广泛地进
行str图谱比较的表达方式，基因分型结果可在实验
室内部及实验室之间进行比较。
为了保证实验室之间的数据重复性和可比性．国
际法医血液遗传学会(international society of forensic
haemogenetics，isfh )在1994年【6】和1997年 对等
位基因提出了命名原则．一般是根据它的重复单位的
重复次数来命名的。[81 1997年会议针对等位基因分型
标准物的应用提出具体要求：等位基因分型标准物中
的所有等位基因应按规则进行测序和命名；无论是购
买商业化试剂盒还是实验室自己制备，等位基因分型
标准物应涵盖所有常见的等位基因，并尽可能拥有罕
见的等位基因，以便可以得到未知样品准确的基因分
型。
str遗传标记的地位决定了allelic ladder在法庭
科学中的重要作用。allelic ladder保证了对应str基
因座的等位基因正确命名。由于str位点的某一等位
基因在片段大小及序列上是惟一的，其在同等条件下
电泳的迁移率也是一致的。对未知样本进行基因分型
有人工和自动化方式两种：用银染显色方法检测未知
样品的dna时，与其旁边泳道的allelic ladder比对即
可进行基因分型；如用毛细管电泳(capillary elec—
trophoresis，简称ce)检测，将结果与该特异基因座的
等位基因分型标准物相比较，等位基因峰值就可以自
动准确地转换成基因分型。
三、等位基因分型标准物的制备
虽然市场上有商品化的str试剂及其对应的al—
lelic ladder可供选择，但很多情况下实验室需要自己
制