【摘要】目的探讨大鼠脑挫伤后hif—la蛋白表达的规律。方法参照feeney，s法建立大鼠脑挫伤模型，分
别于伤后2h，6h，12h，24h，2d，3d，5d，7d，14d取脑，运用免疫组化sabc法观察hif—la蛋白的表达。 结果对照组偶见
阳性反应细胞。损伤后2h，即可观察到hif—la蛋白表达。6h后表达明显增强，24h达高峰，随后阳性反应细胞逐渐减
少，7d后仍可见少量表达，14d后恢复。表达呈弥漫性，以大脑皮层、海马、脑干最为明显，不同部位的变化趋势一致。
各实验组与对照组比较有统计学意义(p<0．05)。 结论hif一1a蛋白的表达规律可用于脑挫伤的鉴定及损伤经过时
间的推断。
【关键词】脑挫伤；法医学；hif—la；免疫组织化学；损伤经过时间
【中图分类号】d919．1
【文献标识码】a
【文章编号】1007—9297(2007)o1—0076—03
study on the of hif—la protein after cerebral contusion in rats and its forensic impficafion．k伽g
dengfeng,liu yanjun，wang yingyuan．school offorensic n~dicine，shanxi medical university，taiyuan 030001，china
【abstract】 ive to explore the of hif—la protein in diferent time after cerebral contusion(cc)．
methods d on feeney’s model of cc and took the samples at 2h，6h，12h，24h，2d，3d，5d，7d，14d after brain injury．the
of hif—la protein was observed by immunohistochemical sabc and image analysis techniques． results the
of hif-la protein could be detected at 2h after injury，increased at 6h and peaked at 24h．positive cells de—
creased with the prolongation of injury time．little was found at 7d． the control group and the 14d group
showed negative staining．the of hif—la protein was found in wide range but significant in cortex，hippocampus
and brain stem．the changing tendency of diferent areas was same．conclusion of hif—la protein is corre—
lated with post-traumatic intervals after cc in rats， suggesting that the of hif-let may be served as the mark—
ers for timing of cc in forensic practice．
【key words】cerebral contusion，forensic medicine，hypoxia inducible factor-let，immunohistochemistry，brain in—
jurytime
低氧诱导因子(hypoxia inducible factor一1，hif一
1)是一种随着细胞内氧浓度变化而调节基因表达的
转录激活因子。缺氧时它能诱导多种缺氧应激蛋白
基因的表达，从而介导各种缺氧适应性反应。它被证
实与神经细胞在缺氧状态下的生存及凋亡密切相
关。尽管hif—ltx已被证实为缺血、缺氧性脑损伤中
具有重要意义的信号转导途径之一，但对其在脑挫
伤后的表达变化规律研究极少。本实验通过检测脑
挫伤后不同时间hif—ltx的表达情况，分析其变化
规律．旨为脑挫伤的法医学鉴定及损伤经过时间的
推断提供参考。
材料与方法
一
、实验动物分组
健康成年wistar大鼠66只(山西医科大学实
验动物中心提供)，体重250 g+10 g，雌雄不限，随机
分为12组。见表1。
表1 实验动物分组
table 1 groups of experimental animals
[作者简介]亢登峰(1976一)，男，山西宁武人，硕士研究生，法医师，主要从事法医病理学研究。e—mai1：kdnxykjw@163．com。
[通讯作者]王英元(1958一)，男，山西稷山人，博士，教授，博士生导师。e—mail：wyy580218@163．com。
法律与医学杂志2007年第14卷(第1期)
二、实验动物处理
损伤组动物参照feeneys法建立大鼠脑挫伤模
型。大鼠称重后，3％的戊巴比妥钠(40 mg／kg)腹腔麻
醉，大鼠脑立体定位仪固定大鼠头部，正中切开顶部
头皮，在人字缝前方3 mm、颅骨中线旁3 mm处，钻直
径5 bin的圆形骨窗。保持硬膜完整，采用自由落体打
击装置，以40g重锤从20cm高处下落打击。术后动
物常规进饮食。在伤后规定时间将大鼠麻醉后开胸，
剪开右心耳，以细管经左心室穿刺至主动脉，依次灌
注生理盐水、 多聚甲醛pbs液和10％蔗糖pbs液
约2 h。对照组直接灌流处死。假手术组仅行颅骨钻
孔，术后24h灌流处死。矢状位取材，固定。
三、常规he和免疫组织化学染色法
把固定好的标本梯度脱水后，制作10 i．zm冰冻
切片，行he和免疫组织化学染色法。操作步骤参照
试剂盒说明书进行，一抗稀释度为1：100，用pbs取
代一抗作阴性对照，以细胞核或胞浆出现棕黄色产
物为阳性结果。兔hif—lcdgg多克隆抗体购自武汉
博士德公司，sabc免疫组化试剂盒、dab显色试剂
盒购自北京莱博公司：其他试剂均为国产分析纯。
四、图像分析及统计学处理
各组切片运用bi一2000图像分析系统，在脑挫
伤区周围随机选取5个高倍视野(×200)，进行
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hif一1仅免疫组化染色阳性细胞记数。实验数据采用
spss l1．5统计软件进行方差分析和q检验，数据以
均数±标准差(x+s)表示。
结 果
一
、he染色结果
对照组神经元细胞形态、结构正常，核染色较
淡、圆形，核仁明显；损伤组可见脑组织出血、挫碎，
蛛网膜下腔、侧脑室出血。所选切面各部位均可见程
度不一的神经元皱缩，染色较深，核深染，核仁消失，
突触减少，神经元细胞周围出现空隙，逐渐发展为神
经元坏死、胞核溶解。胶质细胞肿胀，细胞周围间质
水肿。
二、hif一1 oc蛋白免疫组织化学染色
对照组神经细胞偶见hif一1仪表达。伤后2 h组
即可观察到阳性反应细胞，呈散在少量分布，阳性产
物呈棕黄色，主要位于神经细胞胞核及胞浆内(照片
1)。伤后6 h可见表达hif—la的神经细胞数增多，
表达强度增强，差异有显著性(照片2)；24 h后达高
峰(照