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论鸭疫里氏杆菌油乳剂灭活苗的创新研制

栏目:城建环卫发布:2007-06-13浏览:2634下载163次收藏
  鸭疫里氏杆菌病(又称鸭传染性浆膜炎、鸭疫巴氏杆菌病)是雏鸭一种常见的急性败血性传染病。预防控制该病的方法是药物防治和菌苗接种,我们以本地分离株制备种子液,再将种子液接种鸭胚增殖培养,收获菌液经甲醛灭活后制备成油乳剂灭活菌苗,进行免疫攻毒试验,保护率为75.0%。在部分鸭场使用该菌苗,结果证明安全有效。
1   材料与方法
1.1   材料
1.1.1   菌种。制备菌苗的菌株分离自湖北黄梅县某鸭场,经鉴定后冻干保存。
1.1.2   鸭胚。由湖北神丹健康食品有限公司提供,自行孵化。
1.1.3   试验鸭。10日龄公雏鸭,购自某种鸭场,笼养,自由采食。
1.2   菌苗制备方法
1.2.1   种子液培养。将制苗的菌种以血清营养琼脂平板复苏后接种于加有10ml/l犊牛血清的改良液体培养基中, 37℃摇振培养20h,取培养液接种于血清营养琼脂和血液平板进行纯度检查合格后作为种子液,保存于2~8℃条件下备用,保存期不超过5d。
1.2.2   菌液的制备。将种子液按一定比例稀释后接种健康的12日龄鸭胚尿囊腔内,在37.8℃左右条件下孵化36小时,然后采用无菌操作收取尿囊液和胚体,捣碎后加入最终浓度为0.4%的甲醛溶液进行灭活30小时,并进行质量检测。
1.2.3   菌苗的制备。将灭活后菌液加入一定量的tween-80(94∶6)混匀,使其充分溶解,作为水相。同时将10号白油缓慢加温,并按6%的比例加入span-80,边加温边搅拌,搅匀后再按总体积2%的量加入硬脂酸铝,充分搅拌使其完全溶解,作为油相。将处理好的油相加入乳化罐内,在低速搅拌下缓缓加入水相搅拌,使水相、油相按一定比例混合,使每1ml菌苗中含菌数为200亿个左右,再按总体积加入最终浓度为万分之一的硫柳汞钠,在1000r/min转速下搅拌30min,使水油充分乳化,制成油包水型油乳剂。
1.3   菌
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