摘要:　酪氨酸酶是黑素合成的关键酶，可能是白癜风自身免疫的重要抗原。最近发现部分白癜风患者血清中有酪氨酸酶抗体，且与白癜风临床类型和分期密切相关。提示自身免疫性白癜风发病机制与酪氨酸酶抗体水平有关，为其免疫治疗提供依据。酪氨酸酶抗体可以作为白癜风活动性的一个指标。

　　酪氨酸酶（tyr）是一种75kd含铜酶，来源于胚胎神经峭细胞，是黑素代谢和儿茶酚胺的关键酶。spritz等[1]证实人tyr是一种铜结合蛋白，有铜a和铜b位点。离子铜特异性能与人tyr结合，一个位点的铜结合可以促进另一个位点的铜结合。组氨酸在铜b位点协调其结合。tyr的多肽链的适当折叠对铜结合及其催化活性是关键性的，tyr突变可中断铜结合使其催化活性丧失。眼、皮肤白化病是由于tyr基因突变所致，该病tyr阳性患者色素性皮肤损害发生率高[2]。超氧化物负离子（o2-）能穿透黑素细胞（mc）入胞内，tyr通过利用o2-保护mc，免受o2-细胞毒作用[3,4]。在黑素瘤患者黑素瘤细胞（mmc）和mc中抗氧化系统失衡，内源性反应性氧生成，细胞内不能抵御内源性超氧化物的攻击[5]。白癜风患者血清中tyr抗体的生成，提示白癜风的发病与自身免疫有关。

　　一、酪氨酸酶的抗原性

　　酶是多种自身免疫紊乱性疾病的自身抗原[6]，tyr作为抗原必需具备下列条件：①酶活跃性；②免疫原性；③能诱导识别自身的抗体。

　　tyr能暴露于免疫系统中，从恶性或正常色素细胞来源的tyr，可以作为自身抗体产物的靶抗原；tyr与蛋白酶等无交叉反应，提示抗tyr抗体对tyr是特异性的，mc能表达mhcⅡ类分子，可作为抗原递呈细胞。人mmc能分泌tyr，tyr抗体在黑素瘤患者血清中发现，其它恶性肿瘤患者血清中则没有，提示恶性黑素瘤可产生抗tyr的抗体[7,8]，tyr基因编码抗原能被黑素瘤细胞毒性t细胞（ctl）识别[9]，显示系统免疫系统能对tyr发挥作用[10]。

　　哺乳动物黑素生成由多个基因位点共同参与调控。不同位点基因及相关蛋白具有多种特征性结构位点（b位点，c位点，s位点和p位点）。哺乳动物色素细胞调节基因有多种，这些基因的最大特点是定位于c位点（c-allbino locus），编码tyr。鼠c位点基因长70kb，定位第7号染色体，人c位点基因长50kb，定位11号染色体。鼠及人c位点基因均含有5个外显子和4个内含子。tyr是一种膜糖蛋白，可在mc中特异性表达。b位点（brown locus）基因编码trp-1（gp75）。鼠b位点基因长18kb，有8个外显子和7个内含子，定位14号染色体。人b位点基因定位第9号染色体。trp-1能在mc中表达且定位黑素体膜，具酪氨酸羟化酶和多巴氧化酶活性。s位点（slaty locus）基因编码trp-2，小鼠s位点基因位于第14号染色体，为多巴色素异构酶。鼠及人p位点（pmel-17 locus）基因编码stablin蛋白，人及鼠p位点基因定位第10、12号染色体，参与黑素合成终末途径的调节。

　　tyr、gp75、trp-2结构相似，其基因产物有下列特点：①高同源性（氨基酸序列相同40％，相似45％）。②分子量几乎相同。③三级结构有高度保守序列半胱氨酸残基。④具有酶活性铜结合位点。⑤含有跨膜区。

　　tyr是黑素合成的关键酶，其已知的氨基酸序列含有一段前导信号肽和一个跨膜结构基元（motif），与黑素体膜上的锚定蛋白（anchorin）相一致。hla-a2递呈tyr抗原，不同的细胞毒性t淋巴细胞克隆识别具有活性基元的九肽llavlycll，说明tyr在不同个体的表达呈相当高的同源性。tyr的表达均一性优于trp-2，表达频率亦较trp-1高。除cd8+t细胞外，人cd4+t细胞也能特异性识别tyr基因编码的相关抗原。黑素瘤患者中检出tyr，tyr是mmc上的分化抗原。可作为主动免疫的良好抗原靶。tyr既受mhc-Ⅰ限制，又受mhc-Ⅱ限制的黑素瘤共同抗原，诱生的cd8+t细胞和cd4+t细胞均能产生有效的抗肿瘤应答。trp-1原位杂交证实编码基因位于人第9号染色体q23区，为igg抗体识别抗原，具有dhi-2羧酸氧化酶活性，非突变型trp-1抗原可被hla-a31特异性ctl识别。外源性trp-1cdna在mmc等中表达。gp100即mc/mmc特异性蛋白p mel-17，免疫电镜证实gp100主要位于Ⅰ、Ⅱ期黑素体膜，广泛表达于人mmc（50％）。hla-a2 mmc的gp100可被自体肿瘤浸润性淋巴细胞（til）识别。识别部位是十肽lldgtatlrl（aa457-486），从gp100提取的十肽能体外诱导til，将til细胞与il-2配伍应用于hla-a2+黑素瘤患者，可消除自发性黑素瘤的转移灶。

　　二、酪氨酸酶抗体

　　（一）检测方法：tyr抗体在白癜风患者血清中检出。song等[11]1994年用细菌合成人tyr，免疫印迹法检测tyr抗体。这种方法相对不敏感且不能定量检测。baharav等[12]1996年使用蘑菇tyr，elisa法检测tyr抗体，此法敏感，但所用蘑菇tyr与人tyr同源性低。而xie等[13]1996年则用人mc提取物作为tyr的来源，免疫沉淀法等检测tyr抗体。kemp等[14]1997年采用放免法（ria）检测tyr抗体。近来此法已被用来检测自身免疫性疾病患者血清中的特异性抗体[15-17]。这种方法能敏感定量检测抗体。

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