金丹丹　房岩　费瑞　郝凤桐　马金理　杨文卓

摘 要：白英含有多种化学成分，具有潜在的药用价值和开发前景，但抗炎机制的研究并不完整。本实验以小鼠raw264.7细胞为材料，研究白英甾体化合物的抗炎作用机制，研究发现：白英甾体化合物能明显抑制产生炎症的小鼠raw264.7细胞的tnf-α的炎症因子的表达，提高炎症细胞的线粒体膜电位，白英甾体化合物可能是通过保护线粒体来实现其抗炎作用。

关键词：白英甾体化合物;tnf-α;线粒体膜电位;抗炎

中图分类号：s-3 文献标识码：a doi：10.19754/j.nyyjs.20201130001

炎症是机体自发产生的一种正常反应，但如果反应过度，又会给机体带来损伤。如何有效控制炎症的过度损伤，减轻炎症对身体带来的危害，是如今所要研究的重要课题，对人类健康具有重要意义[1]。白英，又叫鬼目草、葫芦草等，是茄科茄属植物，属多年生蔓性草本植物，分布十分广泛[2]。白英有很大的药用价值，其全草以及根部都可供药用。目前临床上对于白英的应用越来越多，在消肿解毒、抗肿瘤等方面尤为显著。近年来，各研究学者开始对白英的抗炎作用进行研究，发现白英具有较好抗炎效果。研究表明，白英主要通过其各种化学成分发挥作用[3]。tnf-α是非常重要的一种炎症因子，能够反映细胞的炎症水平，抑制tnf-α的表达，可以达到抗炎的目的。线粒体是真核生物非常重要的细胞器，在机体中发挥重要的作用，当机体产生炎症时，线粒体会发生很明显的变化，包括上调ros水平、降低线粒体膜电位等，可以通过这些指标来观察线粒体的情况，因此，研究白英甾体化合物的抗炎作用与对线粒体的关系具有重要意义。

1 材料

1.1 仪器

细胞培养箱;超净工作台;酶标仪;倒置显微镜;电子天平;低速离心机;荧光显微镜等。

1.2 试剂

dmem培养基;胎牛血清;pbs;双抗;cck-8试剂;tnf-α的elisa检测试剂盒;线粒体膜电位检测试剂盒（jc-1）。

1.3 药品与细胞

白英甾体化合物干粉由吉林省中医中药研究院馈赠，利用pbs使其溶解，实验所需细胞为小鼠raw264.7细胞购自中国细胞库，对照组为地塞米松。

2 方法

2.1 药品配制及细胞培养

取白英甾体化合物的干粉，用pbs将其溶解，然后过滤并进行高压灭菌。小鼠raw264.7细胞用dmem培养基进行培养，加入胎牛血清和双抗（青霉素、链霉素），在37℃、5%co2的細胞培养箱中进行传代培养，培养至对数生长期可供实验使用。

2.2 白英甾体化合物对小鼠raw264.7细胞活力的影响

取培养的小鼠raw264.7细胞，加入培养基并轻轻吹打，使细胞悬浮到液体中，加入到96孔板中，使每孔体积200μl，细胞密度为1×104ml/个，放入培养箱中培养24h，使细胞贴壁生长，然后把孔内液体吸出，加入含有不同浓度的白英甾体化合物的dmem培养基，并加入lps，分为5组：空白组，白英甾体化合物高、中、低剂量组（白英甾体化合物的浓度分别为40μg·ml-1、20μg·ml-1、5μg·ml-1），地塞米松阳性对照组[4]。

2.3 cck-8法测定细胞活力

上述5组作用24h后，每孔加入10μlcck-8，静置30min，把酶标仪的波长调至450nm，测定上述各孔吸收的od值。

2.4 白英甾体化合物对小鼠raw264.7细胞tnf-α表达的影响

细胞培养同上所述，分组情况同上，按照tnf-α的elisa检测试剂盒的说明书进行操作，测量小鼠raw264.7的炎症因子的表达情况。

2.5 白英甾体化合物对小鼠raw264.7细胞线粒体膜电位的影响

在上述培养的细胞中，加入脂多糖，按照分组浓度，加入白英甾体化合物，在细胞培养箱中培养24h后，每组取1×105个细胞，重悬于0.5ml细胞培养液中，按照线粒体膜电位检测试剂盒的说明书进行操作，以测定线粒体膜电位的变化情况[5]。

2.6 数据的统计分析

使用graphpad prism 5.0软件对试验数据进行统计学分析。

3 结果

3.1 白英甾体化合物对小鼠raw264.7细胞活力的影响

结果显示，与空白组相比较，白英甾体化合物的高中低剂量组和阳性对照组细胞活性明显偏低，白英甾体化合物的高中低剂量组又高于地塞米松组，但各组之间无统计学差异（p>0.05）。说明在试验浓度范围内，不同浓度的甾体化合物和地塞米松不影响小鼠raw264.7细胞活性，对小鼠raw264.7细胞没有毒性作用，与林世和等研究结果一致[6]。

3.2 白英甾体化合物对小鼠raw264.7细胞tnf-α表达的影响

结果显示，与空白组比较，lps显著提升了小鼠raw264.7细胞tnf-α的表达，其差异具有统计学意义（p