张卓炜，艾强云，何 洋，张 辉，李 英，郭剑英，唐兆新*

(1.华南农业大学，广州 510642; 2.云南农业大学，昆明 650500)

钙元素对于整个妊娠过程有着举足轻重的作用。在妊娠初期时，胎胚尚处于细胞分裂及脏器发育的初级阶段。此时胎儿对钙的需求量不会发生显著变化，因而不宜过多地补充钙，以免诱发高钙血症、结石及骨骼过度钙化等。但随着孕期的增长，尤其是在怀孕后期，由于胎儿的牙齿与骨骼加速钙化致使母体所需供给的钙量大幅度增加，此时钙缺乏将严重威胁到母体及胎儿的健康。当血清中的钙浓度低于正常阈值，机体便会激活破骨细胞并从钙库内抽调钙源以维持血钙浓度的稳定。但长期动用骨钙，轻则会影响神经系统和骨骼肌运动，重则可导致骨质疏松与瘫痪的发生。缺钙时钙离子通道开放受阻，进而使得肌纤维蛋白和肌凝蛋白无法作用于相应结合位点，最终导致子宫肌收缩乏力，引发难产。此外，妊娠期母体的血钙浓度还与产后出血症的发生相关。

动物的脂肪主要由脂肪酸和甘油合成而来。脂质的代谢是为日常生理活动供能的重要环节。脂质及其衍生物可参与包括体温调节、生物膜的组建、调控胰岛素敏感性、保护血管以及免疫反应等。脂肪不仅是初生仔猪重要的能量来源，并且脂肪组织本身还是一类内分泌器官，对调控诸如脂联素、抵抗素以及瘦素等物质的分泌至关重要。

基于现代养殖业技术的快速发展，猪群在提高生产效益的同时所承受的生理负荷也越发加重，导致钙磷代谢相关疾病的发生率也呈现出上升趋势。当胎猪受母体低钙胁迫影响时，对其脂质代谢过程又会产生何种影响，本文就围绕该问题的原因和机理进行探索，为相关领域的研究提供科学依据。

本试验于广东省韶关市翁源县丰泽畜牧养殖有限公司猪场内进行。选取20头健康的7～8胎龄母猪并随机分成对照组(con组)和低钙组(lca组)，每组10头作生物学重复。按不同钙磷比配置日粮，对照组(钙∶磷=0.75∶0.592)，低钙组(钙∶磷=0.65∶0.513)。于妊娠第85天连续饲喂至第114天分娩。所有试验母猪的日常饲养流程均严格按照该猪场的常规饲养管理办法进行。日粮营养成分的调配遵照nrc(national research council, 2012)标准，饲料组成及营养水平见表1。

表1 基础日粮组成与营养水平(风干基础)table 1 basal diet composition and nutrient levels (air-dried basal) %

于母猪分娩后的1 h内，在同窝中筛选出体重位于中位数，且无明显异常的新生健康仔猪作为研究对象。前腔静脉采血收集仔猪血液后，实施麻醉采集其肝肾组织样本并置于液氮中保存备用。

代谢组学检测所使用的l-2-氯-苯丙氨酸(0.3 mg·ml)、甲醇、乙腈、二氯乙烷以及pbs溶液均为lc-ms级别试剂，购自美国fisher chemical公司；生化仪检测所使用的总胆固醇(total cholesterol, tc)、三酰甘油(triglyceride, tg)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, hdl-c)以及低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, ldl-c)试剂，购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；elisa检测所使用的猪总胆固醇(tc)、三酰甘油(tg)、瘦素(leptin, lep)、脂联素(adiponectin, adpn)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase, fas)、抵抗素(resistin)、内脂素(visfatin)以及白细胞介素-6(interleukin-6, il-6)elisa试剂盒，购自上海酶联生物科技有限公司；荧光定量相关引物(表2)由上海生工生物工程股份有限公司合成。使用的相关试剂，购自南京诺唯赞生物科技有限公司。

表2 基因引物序列table 2 gene primer sequences

由图1和表3可见，con组与lca组差异代谢物的数据处理结果。其中，质控qc样本集中，各项调试标准合格。pca分析中所有样本均位于大椭圆内(95%的置信区间)，同组样本聚类良好，不同组别间的样本聚类区分明显，证明con组与lca组具有明显的差异性。pls-da与opls-da参数中与差值0.9，证明模型参数稳定且具备很好的预测能力。

图1 差异代谢通路分析fig.1 differential bolic pathway analysis

表3 模型参数table 3 model parameters

由图1中可见，con组与lca组的差异代谢物及信号通路富集结果。包括甘油磷脂代谢、糖基磷脂酰肌醇生物合成、磷脂酰肌醇信号系统、乳糖代谢、不饱和脂肪酸生物合成、脂肪酸降解以及鞘脂代谢等。其中变化最为显著的是甘油磷脂代谢通路(glycerophospholipid bolism)。

由表4可见，仔猪血清中tc、tg、hdl-c以及ldl-c含量均无显著差异(>0.05)。

表4 血清中脂类物质table 4 lipids in serum mmol·l-1

由表5可见，仔猪肾中脂质代谢指标的检测结果。其中，lca组与con组相比，fas、resistin以及visfatin含量显著降低(