段培姿 曹薇

摘 要：甲酸钙、双乙酸钠和丙酸盐是饲料中3种最常用的酸化剂。这些酸化剂可提高饲料酸度，还具有防腐、防霉的作用。目前，国家已依法将其纳入规范化管理。因此，研究饲料中甲酸钙、双乙酸钠和丙酸盐的测定方法极其重要。

关键词：酸化剂;饲料;甲酸钙;双乙酸钠;丙酸盐

1? ? 饲料中酸化剂添加存在的问题

甲酸钙、双乙酸钠和丙酸盐作为饲料添加剂，食用时存在以下问题：（1）添加酸量大则大大增加了成本，而且不能做预混料的材料。（2）添加的酸量少，则与饲料中碱性物质、胆汁中和，无法保存。（3）添加酸量少的话也容易与饲料中的维生素、矿物元素反应，无法保存。（4）添加酸过多的饲料，在胃中吸收过快，会对胃造成损伤。（5）添加酸量少，饲料到不了小肠，就不能起到调节肠道菌群的作用。（6）易受潮、结块，影响饲料的品质。（7）添加量过多，会腐蚀饲料加工设备、仓储设备、运输车辆。因此，针对酸化剂的这些问题，准确检测出酸化剂的质量分数，找到最适合的添加量非常必要，可以帮助企业节约成本，实现固定资产的保值，还可以找到最适合的饲料配方，提升饲料的口感和品质，提高企业的效益。

2? ? 饲料中酸化剂测定方法

目前，针对饲料中酸化剂的测定方法只有《饲料中丙酸、丙酸盐的测定》（gb/t? 17815—2018），该方法的原理是：试样中丙酸、丙酸盐经酸化后，丙酸盐转化成丙酸，经过蒸馏将丙酸与基质分离，馏出液中的丙酸再通过气相色谱仪氢火焰离子化检测器或者液相色谱仪紫外检测器检测，用外标法定量。与国标方法相比，本方法在以下4个方面存在不同。

（1）甲酸钙、双乙酸钠和丙酸盐都是两种或者两种以上同时添加至饲料中，该方法可一次检测出，节约了检测成本，节省了检测时间，提高了检测效益。（2）运用高效液相色谱法测定饲料中的双乙酸钠、甲酸钙和丙酸盐，得到了很好的响应值和灵敏度，准确度和精密度都很高，可以用作实验室内部指控、初筛。（3）本研究针对甲酸、乙酸、丙酸易溶于水且成分比较简单的特性，提取液不需要进一步净化，经滤膜过滤后上机测定。本方法除了采用蒸馏法提取外，还采用了经超声波水浴提取，这样提取效率提高，簡化了提取设备和流程，也得到了很好的回收率和准确性。（4）本方法简便快速、重现性好、灵敏度高、分离效果良好、检测结果可信度高，作为饲料中甲酸钙、双乙酸钠和丙酸盐的测定方法，与国际标准方法相比回收率满足要求。

本研究介绍的方法适用于饲料中甲酸钙、双乙酸钠、丙酸盐的测定。试样中甲酸钙、双乙酸钠、丙酸盐易溶于水，经磷酸酸化后转化为甲酸、乙酸、丙酸，再利用蒸馏法或直接提取法提取，在高效液相色谱仪上进行分析。

3? ? 实验过程与结果

3.1? 样品提取条件

通过不断的优化、选择，最终确定了蒸馏法和直接浸提法的最优条件。蒸馏法：用感量为0.1 mg的分析天平准确称取25 g试样，置于500 ml蒸馏瓶中，加100 ml水，再用50 ml水冲洗容器，转移到蒸馏瓶中，加磷酸溶液（1 mol/l）20 ml，2～3滴硅油，进行水蒸气蒸馏，将250 ml容量瓶置于冰浴中作为吸收接收装置，待蒸约240 ml时取出，在室温下放置30 min，用1 mol/l磷酸溶液调ph为3左右，加水定容，摇匀，经0.45 μm水相微孔滤膜过滤后，用液相色谱测定。直接浸提法：用感量为0.1 mg的分析天平准确称取5 g试样至100 ml烧杯中，加水20 ml，加11 mol/l磷酸溶液0.5 ml，混匀，经超声浸提30 min后，用磷酸溶液（1 mol/l）调ph至3左右，转移至50 ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。将试样全部转移至50 ml具塞塑料管中，以不低于4 000 r/min离心10 min，取上清液，经0.45 μm水相微孔滤膜过滤后，用液相色谱测定。两种方法都能得到很好的回收率，保证了检测结果的准确性。

3.2? 检测波长的选择

处理好的试样经高效液相色谱仪，分别对双乙酸钠、甲酸钙、丙酸盐进行光谱扫描，在190～400 nm 检测波长范围内，观察、比较3种物质的紫外谱图，可以得到甲酸钙、双乙酸钠、丙酸盐的最大吸收波长分别为210、192、194 nm。因为当最大吸收波长为192、194 nm时，不在远紫外区，双乙酸钠和丙酸盐均不容易检测到，所以本实验采取了国标（gb/t 23383—2009）方法中的波长进行加标回收试验，通过试验数据比较和分析重复测量结果发现，双乙酸钠、丙酸钙在检测波长为210 nm时，结果的准确性和重复性均满足要求。因此，把3种酸的最大吸收波长均定位为210 nm。

3.3? 流动相的选择

甲酸钙、双乙酸钠、丙酸盐这3种有机酸均为弱酸，容易在水系流动相中发生解离，而不被非极性键合相保留，一般情况下，采用酸性磷酸氢盐溶液抑制有机酸的解离，改善有机酸的保留时间和分离。综合文献资料，酸的存在形式和稳定性受磷酸盐缓冲液质量浓度影响较大，分离效果非常明显。磷酸盐缓冲液质量浓度、ph、温度对有机酸的分离影响较大，通过排列组合的方法，在不同的磷酸盐缓冲液质量浓度、ph、柱温条件下，加标回收测量3种物质的量，通过比较，最终确定磷酸盐缓冲液质量浓度、ph、温度分别为1 mol/l、2.5、40 ℃为最佳的分离条件。

3.4? 标准的重复性和精密度的确定

配置质量浓度为10～500 μg/ml的甲酸、乙酸、丙酸混合标准溶液，用上述的方法进行检测，以标准溶液的质量浓度作横轴、峰面积作纵轴画标准曲线。可见所测量的3种有机酸标准溶液在10～500 μg/ml的范围内线性关系非常好。所研究的方法和设定的条件，将标准溶液连续稀释后进行空白样品的加标回收，根据10倍噪音求出峰响应值，再通过计算取样量和进样量，得出方法的定量限，具体结果如表1所示。

表1? 有机酸线性关系

项目 线性方程 相关系数r 定量限/%

甲酸 y=153 139x+0 0.999 4 0.05

乙酸 y=40 553.5x+0 0.999 8 0.05

丙酸 y=100 651x+0 0.999 9 0.05

应用建立的方法，对从市场上获得已知质量分数的饲料酸化剂进行测定，检测结果如表2所示。

结果表明：采用高效液相色谱法可同时检测分析饲料中甲酸钙、双乙酸钠和丙酸盐的化学测质量分数，具有简便、快速、成本低、能使各组分较好地分离等特点，并表现出较高的准确性和精确度。其测试成本低、准确度高、精密度好，有很好的推广价值。