雷静 廖爽 乔茜茜 吕警

摘???要：总大肠菌群目前作为评价水质的一项指标，是反映水样是否受到粪便污染的指标。固定酶底物法是从美国引进的一种大肠杆菌新型检测方法。该方法采用酶底物法测定生活饮用水中的总大肠菌群、大肠埃希氏菌，分析了不同浓度水样的精密度，低浓度水样的精密度为，1.6%、2.0%;中浓度水样的精密度为1.3%、1.8%;高浓度水样的精密度为2.0%、4.3%;阳性标准菌株的精密度均为0.86%。

关键词：酶底物法???总大肠菌群???大肠埃希氏菌???精密度

中图分类号：r123???????????文献标识码：a???????????文章编号：1672-3791（2022）07（b）-0000-00

precision?analysis?of?total?coliform?group?and?escherichia?coli?in?drinking?water by?enzyme?substrate?method

lei?jing1 liao?shuang1??qiao?qianqian1 lyu?jing2*

（1.xinjiang?changyuan?water?science?research?institute?co.?ltd.;2.quality?and?safety?testing?center?of?urumqi?agricultural?products，?urumqi，?xinjiang?uygur?autonomous?region，?830000?china）

abstract：?total?coliform?group?is?currently?used?as?an?index?to?evaluate?water?quality，?which?is?an?indicator?of?whether?the?water?sample?is?contaminated?by?feces.?enzyme?substrate?method?is?a?new?detection?technology.?this?method?uses?enzyme?substrate?method?to?determine?the?total?coliform?group?and?escherichia?coli?in?drinking?water，?and?analyzes?the?precision?of?different?concentrations?of?water?samples.?the?precision?of?low?concentration?of?water?samples?is?1.6%?and?2.0%.?the?precision?of?medium?concentration?water?sample?was?1.3%?and?1.8%.?the?precision?of?high?concentration?water?sample?was?2.0%?and?4.3%.the?precision?of?positive?standard?strains?was?0.86%.

key?words：?enzyme?substrate?method;?total?coliform;?escherichia?coli;?precision

微生物常規检测指标为总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌。它们均可作为检验肠道致病菌的指示菌，是进行卫生学评价的重要内容。总大肠菌群是指一群在37?℃培养24?h，能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。总大肠菌群目前作为评价水质的一项指标，是反映水样是否受到粪便污染的指标[2]。生活饮用水中针对大肠菌群、大肠埃希菌等的检测技术主要包括乳糖蛋白胨多管发酵法、滤膜法、固体酶底物法[3]?，其中多管发酵法为仲裁法[4]。固定酶底物法[5]是从美国引进我国的一种大肠杆菌检测方法，此方法简单、方便、快速、无培养基的制作与干扰等优点[6]。目前被美国、欧洲及大部分亚洲国家广泛应用于水中总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌的检测。并通过美国epa、《水与废水标准检测方法》以及我国《生活饮用水标准检验方法》认证[7]。

1????实验部分

1.1??材料与试剂

1.1.1试剂

在该实验中酶底物法所用酶底物法检测试剂?mmo-mug培养基，无菌定量瓶（带100?ml刻度），51孔定量检测盘均购买于西安立科环保科技有限公司。

1.1.2仪器设备

隔水式恒温培养箱型号：ghp-9270，高压蒸汽灭菌器型号：ldzx-50kbs，程控定量封口机型号：lk-2010，手提式暗箱紫外分析仪型号：zk-5。

1.1.3??标准菌株

阳性标准菌株：大肠埃希菌菌种号cmcc（b）44102?来源：南京便诊生物科技有限公司;阴性标准菌株：铜绿假单胞菌菌种号cicc?21636来源：中国工业菌种保藏中心。

1.2???试验方法

用无菌定量瓶量取100?ml水样（或稀释后水样），将2.?7?g?m?m?o-m?u?g培养基加入待测水样中，使其完全溶解，混合均匀，然后将100?ml水样全部倒入51孔无菌定量盘内，用手抚平定量盘背面以赶除孔穴内气泡，用程控定量封口机封口，放入（37±1）℃培养箱中培养24?h（如显色不明显可延长至28?h）。将培养24?h后的定量盘取出观察，如孔格内水样变黄则说明该孔内含有大肠菌群，将培养24?h后的定量盘放置于波长366?nm?紫外光下照射，有荧光的孔格说明该孔内含有大肠埃希氏菌。最后计算变黄或变黄且有荧光的孔数对照酶底物法51孔最可能数（mpn）表，查出其代表的总大肠菌群或大肠埃希氏菌最可能数[8]。

2???结果与分析

2.1低浓度水样检测结果

如表2所示，通过预试验选择的中浓度水样进行了6次平行检测，样品稀释10倍，总大肠菌群、大肠埃希氏菌平行检测结果有了一些差异，精密度分别为1.3%、1.8%。

2.3??高浓度水样检测结果

如表3所示，通过预试验选择的高浓度水样进行了6次平行检测，样品稀释10?000倍，总大肠菌群、大肠埃希氏菌平行检测结果差异比低浓度和中浓度要大，精密度分别为2.0%、4.3%。

2.4阳性标准菌株菌悬液检测结果

如表4所示，将已复活复壮的阳性标准菌株配制成1麦氏比浊度的菌悬液，细菌约为3×108?cfu/ml，再将菌悬液稀释108倍再进6次平行行检测。精密度均为0.86%，因为该实验中所使用的阳性标准菌株为大肠埃希菌，可以作为总大肠菌群的阳性指示菌，故总大肠菌群、大肠埃希氏菌平行检测结果一致，精密度也一致。

2.5?陰性及空白对照

阴性对照试验参照阳性对照实验检测方法，经24?h培养后，阴性对照的51孔定量盘样品的颜色未发生变化，呈现阴性反应，该次样品测定结果有效。测定总大肠菌群、大肠埃希氏菌空白时，用无菌水代替试样参照阳性对照实验检测方法经24?h培养后的?51?孔定量盘均无任何颜色反应，检测结果满足实验要求。

3??结果与讨论

该次实验总大肠菌群精密度检测结果为?1.3%≤rsd≤2.0%?;大肠埃希氏菌精密度检测结果为?1.8%≤rsd≤4.3%。固定酶底物法操作方便，检测时间、培养时间都较短，而且不需要确认试验，能够对水样中的微生物污染情况进行准确检测和判断;能够同时检测大肠菌群和具有病原学意义的大肠埃希氏菌，特异性较高，灵敏高，可以很大程度降低实验过程中引入的污染，避免了二次污染的发生，对实验操作环境要求较低，不需要严格的无菌环境，对监测人员技术能力要求降低。酶底物法很好地弥补了传统检测方法在检测时间、灵敏度上的不足，可以很好地应用在生活饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测，替代传统方法成为微生物检测的发展趋势。

参考文献

[4]?楼小平，林增飞.多管发酵法和酶底物法检测总大肠菌群的结果差异性[j].净水技术，2020，39（6）：14-17，37.

[5] 张晓华，高瑞红，王骥涛，等.酶底物法检测水中菌落总数的效果评价[j].山西医药杂志，2020，49（12）：1491-1492.

[6] 黄利美，黄锦婷，杨颖.酶底物法与多管发酵法检测大肠菌群的方法探讨[j].饮食保健，2018，5（1）：260.

[7]? 杨晓冉，朱超，张付海，等.固定酶底物法测定水中粪大肠菌群的优点及影响因素[j].环境科学导刊，2017，36（5）：87-90.

[8] 罗匀.水中粪大肠菌群（耐热大肠菌群）两种检测方法的比较研究[j/ol].城市建设理论研究（电子版）：551-555[2013-06-15].https：//wenku.baidu.com/view/b6ad7bc019e8b8f67c1cb952？fr=xueshu.