【摘要l目的探讨普通甲醛对人体组织dna的影响及提高str检出率的手段。方法取少量石蜡包埋组织，65℃水浴脱蜡，
chelex一100法提取dna，pcr扩增，循环次数分别为28次和28+6次，扩增产物经310型测序检测。结果普通甲醛固定5 d以内的
组织基本上可检出amel及15个str基因座。固定时间延长，检出率下降；pcr循环次数增加，灵敏度增加，但有错误分型的情况。
结论普通甲醛固定时问长短直接影响pcr—str的检验。减少模板量有利于pcr反应成功，pcr次数为28+6时，灵敏度增加，但
应谨慎判读结果，以免错误分型。
【关键词】石蜡包埋组织；dna提取；str
【中图分类号】d919．2
【文献标识码】b
【文章编号】1007—9297(2006)01—0050—03
在某些民事案件中。成功对石蜡包埋组织进行
pcr—str分型来判断其归属问题。对案件的解决起到
重要作用。目前国内医院及科研机构大多使用普通
10％甲醛固定人体组织。普通10％甲醛固定石蜡包埋
的组织中dna降解相对严重，提取高质量的dna并
进行pcr—str分型较为困难。实践中人体组织固定
时间长短不一，但以1周左右多见。本文的目的是探
索普通10％甲醛固定时间对pcr—str分型的影响以
及提高检出率的适当方法。
材料与方法
一
、材料
石蜡包埋人体组织均取自本所病理室。5个无关
个体的心、肾组织用1o％普通甲醛固定5 d、8 d、12 d
和15 d以上时．剪取组织边缘甲醛完全浸润处。石蜡
包埋，常规切片he染色，显微镜下观察确保组织结构
清晰，无自溶、坏死和大片出血后，作为本研究材料使
用。
二、方法
1．预处理。切取8 ixm厚的石蜡包埋组织，尽量剔
除石蜡部分，放入0．5 ml离心管中；或挖取小米粒大
的石蜡包埋组织，放入0．5 ml离心管中。加入500
ddw，65c【=保温10min脱蜡，弃除液体。【 】
2．dna的提取。向每个离心管中加入150 ixl的
5％chelex一100和8 l pk (20mg／m1)，56 c【=保温过夜，
次日再加4 lpk(20mg／m1)，再消化4h，振荡后，100cc
8rain，13000 rpm／min离心3rain，4 oc备用。
3．pcr扩增。采用identifiler荧光复合扩增。采用
10 l反应体系，热循环条件：95 c【=预变性l1 rain；94
oc 1rain，59 oc lmin，72℃ lmin，循环次数分别为28
次，28+6次(循环28次后，每反应管加0．3 ixl ampli
taq gold dna聚合酶，再循环6次)；[2】最后60℃延伸
45raino
4．上样检测。取1．5 l dna pcr产物与l2 l甲
酰胺(formamide)、0．4 ixl内标(l